شركة Foregene المحدودة
الصين للأبد ، العالم أجمع!
 |
| مكان المنشأ: | الصين |
| اسم العلامة التجارية: | FOREGENE |
| إصدار الشهادات: | ISO |
| رقم الموديل: | RT-02011 |
| الحد الأدنى لكمية: | 1 أطقم |
|---|---|
| الأسعار: | 224 usd per kit |
| تفاصيل التغليف: | التعبئة مع الكرتون العابر الآمن |
| وقت التسليم: | 7-10 أيام عمل |
| شروط الدفع: | L / C ، D / A ، D / P ، T / T ، ويسترن يونيون |
| القدرة على العرض: | 10000 مجموعة شهريا |
| اسم المنتج: | RT-qPCR EasyTM (خطوة واحدة) -Taqman Cat.No.RT-02131/02132 One-step Real-Time RT-PCR Master Mix | طلب: | لرد فعل qPCR |
|---|---|---|---|
| التعبئة: | 100 rxns لكل مجموعة | موك: | 1 أطقم |
| الوقت الرائد: | 7-10 أيام عمل | ماركة: | فورجين |
| OEM: | وافقت | ||
| تسليط الضوء: | RT-QPCR EasyTM Taqman,Real Time RT PCR Master Mix |
||
RT-QPCR EasyTM (خطوة واحدة) -Taqman Cat.No.RT-02131/02132 One-Step Real-Time RT-PCR Master Mix
القط رقم RT-02131/02132
مزيج رئيسي RT-PCR من خطوة واحدة في الوقت الحقيقي
RT-PCR EasyTM I (خطوة واحدة)
Cat.No.RT-02011/02012
خطوة واحدة RT-PCR Master Mix
للاستخدام البحثي فقط
تخزينها في -20 درجة مئوية
تدرك منتجات سلسلة Foregene One-Step RT-PCR EasyTM التفاعل المتكامل من RNA إلى الحمض النووي مزدوج الشريطة ، أي اكتمال النسخ العكسي وتضخيم PCR في نفس أنبوب الطرد المركزي ونفس نظام التفاعل ، مما يبسط الخطوات التجريبية ، يحسن البرنامج التجريبي ، ويحسن كفاءة التجربة.
RT-qPCR سهلTM(واحدالخطوة) -تقمانباستخدام Foregene HotStar Taq DNA Polymerase ، يمكن لنظام Taqman qPCR المحسن إجراء الكشف الكمي في الوقت الحقيقي RT-qPCR بسرعة وعلى وجه التحديد لقوالب الحمض النووي الريبي التتبع.
- تتيح المجموعة المكونة من خطوة واحدة إجراء النسخ العكسي و PCR في نفس الأنبوب ، وتحتاج فقط إلى إضافة قالب RNA ، وأشعال PCR محددة و RNase-Free ddH2O.
- يمكن إجراء التحليل الكمي في الوقت الحقيقي للـ RNA الفيروسي أو تتبع الحمض النووي الريبي (RNA) بسرعة وبدقة.
- تستخدم المجموعة كاشف النسخ العكسي الفريد Foregene و Foregene HotStar Taq DNA Polymerase جنبًا إلى جنب مع نظام تفاعل فريد لتحسين كفاءة التضخيم وخصوصية التفاعل بشكل فعال.
- يجعل نظام التفاعل المحسن التفاعل يتمتع بحساسية كشف أعلى ، واستقرار حراري أقوى ، وتحمل أفضل.
- RT-qPCR EasyTM (خطوة واحدة) - تأتي مجموعة Takman مع صبغة مرجعية داخلية ROX ، والتي يمكن استخدامها للتخلص من خلفية الإشارة وأخطاء الإشارة بين الآبار ، وهو أمر مناسب للمستخدمين النهائيين لاستخدامها في نماذج مختلفة من أدوات PCR الكمية
مراقبة جودة المنتج
وفقًا لنظام إدارة الجودة الشاملة FOREGEN (نظام إدارة الجودة الشاملة لشركة FOREGENE) ، فإن كل دفعة من RT-PCR EasyTMيتم اختبار مجموعات (خطوة واحدة) بشكل صارم عدة مرات لضمان الجودة والموثوقية والاستقرار لكل مجموعة مجموعات.
| RT-PCR EasyTM I (خطوة واحدة) | ||
| محتويات المجموعة | RT-02011 | RT-02012 |
| 100T (نظام 20 مايكرولتر) | 500T (نظام 20 مايكرولتر) | |
| 2 × RT-PCR EasyTM Mix | 1 مل | 1.7 مل × 3 |
| RNase خالية من ddH2O | 1.7 مل | 1.7 مل × 3 |
| كتيب التعليمات | 1 قطعة | 1 قطعة |
1- شروط النقل
العملية الكاملة لنقل صندوق الثلج بدرجة حرارة منخفضة ، للتأكد من أن المجموعة في حالة أقل من 4 درجات مئوية.
2. شروط التخزين
يتم تخزين RT EasyTM I في درجة حرارة -20 درجة مئوية.قم بتخزين المنتج في ثلاجة بدرجة حرارة ثابتة عند -20 درجة مئوية مباشرة بعد الاستلام.إذا كانت ظروف التخزين مناسبة ، فلن يؤدي المنتج إلى تدهور أي أداء خلال فترة الصلاحية التي تبلغ 1 عام.
2 × RT-PCR EasyTM Mix: Foregene Reverse Transcriptase ، RNase Inhibitor ، Foregene HotStar Taq DNA Polymerase ، dNTPs ، Mg2 + ، مخزن مؤقت للتفاعل ، محسن ومثبت ، إلخ.
بالنسبة للقوالب ، يوصى باستخدام الحمض النووي الريبي المستخرج من العينات الطازجة أو المخزنة عند -80 درجة مئوية (يجب تجنب تكرار التجميد والذوبان).
من أجل تجنب تلوث RNase ، يجب إجراء العملية التجريبية في مساحة خالية من RNase ؛يجب أن تكون أطراف الماصة وأنابيب الطرد المركزي PCR خالية من RNase ؛ويجب ارتداء القفازات والأقنعة التي تستخدم لمرة واحدة.قبل الاستخدام ، ضعي 2 × RT-PCR EasyTM Mix على الجليد ليذوب تمامًا ونفض الغبار وخلط جيدًا قبل الاستخدام ؛يجب تشغيل إعداد النظام على حمام جليدي لتحسين أداء المجموعة وخصوصية تضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل.
RT-PCR EasyTM I (خطوة واحدة) :( 0.1pg-1μg إجمالي RNA) / نظام 20μl
تطبيق كيت
- تُستخدم هذه المجموعة للكشف السريع عن الجينات عالية النسخ ومنخفضة النسخ.
- مناسب بشكل خاص للكشف السريع عن قوالب الحمض النووي الريبي ذات المحتوى العالي من GC أو البنية الثانوية المعقدة.
مراقبة جودة المنتج
وفقًا لنظام إدارة الجودة الشاملة FOREGEN (نظام إدارة الجودة الشاملة لشركة FOREGENE) ، فإن كل دفعة من RT-PCR EasyTMيتم اختبار مجموعات (خطوة واحدة) بشكل صارم عدة مرات لضمان الجودة والموثوقية والاستقرار لكل مجموعة مجموعات.
ج: تحضير المواد والكواشف
1. إعداد قالب الحمض النووي الريبي المحضر (من المستحسن استخدام مجموعات سلسلة Foregene Total RNA Isolation Kit لاستخراج وتنقية الحمض النووي الريبي) ، وأشعال محددة (10 ميكرومتر) والمواد الاستهلاكية والأدوات ذات الصلة.
ملاحظة: يرجى التأكد من سلامة الحمض النووي الريبي ومحاولة استخدام الحمض النووي الريبي المستخرج من عينات جديدة.
2. ضع 2 × RT-PCR EasyTM Mix و RNase-Free ddH2O في حمام جليدي للسماح له بالذوبان بشكل طبيعي ، ثم حرك جدار الأنبوب لخلطه جيدًا لاستخدامه لاحقًا.
ب: إعداد نظام RT-PCR
2 × RT-PCR EasyTM Mix مريحة وسريعة الاستخدام ، وتجنب التلوث أثناء التشغيل والأخطاء التجريبية التي تسببها الاستعدادات المتعددة لنظام التفاعل إلى أقصى حد.عند الاستخدام ، نصف حجم نظام التفاعل فقط (على سبيل المثال ، إذا كان نظام التفاعل 20 ميكرولتر ، خذ 10 مايكرولتر 2 × RT-PCR EasyTM Mix) ، أضف كمية مناسبة من قالب RNA وأشعال محددة ، وأضف RNase-Free ddH2O لتشكيل الحجم.الرجوع إلى الجدول 1 أدناه لإعداد نظام رد فعل RT-PCR المحدد.
النموذج 1: إعداد نظام RT-PCR
| إضافات نظام RT-PCR | مقدار | التركيز النهائي |
| 2 × RT-PCR EasyTM Mix | 10 ميكرولتر | 1 × |
| التمهيدي الأمامي (10 ميكرومتر) | 0.5 ميكرولتر | 0.2-0.25 ميكرومتر 1 * |
| عكس التمهيدي (10 ميكرومتر) | 0.5 ميكرولتر | 0.2-0.25 ميكرومتر 1 * |
| قالب (RNA) | Xμl | 0.1pg - 1 ميكروغرام |
| RNase-FreeddH2O | (9 ×) ميكرولتر | |
| الحجم الكلي | 20 ميكرولتر |
1 *: عادة ما يكون التركيز النهائي للبرايمر هو 0.2-0.25 ميكرومتر للحصول على نتائج أفضل.عندما يكون أداء التفاعل ضعيفًا ، يمكن ضبط تركيز التمهيدي في نطاق 0.1-0.5 ميكرومتر.
ملحوظة: Forward Primer و Reverse Primer هما البرايمر المحدد للجين المستهدف ؛نظام 50 مايكرولتر ، يرجى الرجوع إلى نظام 20 ميكرولتر لضبط جرعة الكاشف بشكل متناسب.
ج: إعداد برنامج تفاعل RT-PCR
2. الرجوع إلى إعدادات برنامج تفاعل RT-PCR (الجدول 2) لضبط درجة الحرارة ووقت التفاعل.
ملاحظة: من أجل ضمان نشاط 2 × RT-PCR EasyTM Mix وتحسين كفاءة التضخيم ، فمن الأفضل تحضير نظام تفاعل RT-PCR بعد ضبط برنامج أداة PCR ، بحيث يمكن إدخال برنامج التفاعل فورًا بعد ذلك. النظام جاهز.
النموذج 2: إعداد نظام تفاعل RT-PCR
| خطوة | درجة الحرارة | زمن | دورات | محتوى |
| 1 | 42 ℃ | 10-30 دقيقة | 1 | RT |
| 2 | 94 | 5 دقائق | 1 | التشبع المسبق |
| 3 | 94 | 10 ثوانى | 30-40 | تمسخ |
| 4 | 55-65 | 20 ثانية | التلدين | |
| 5 | 72 ℃ | Xmin (2 كيلوبايت / دقيقة) | امتداد | |
| 6 | 72 ℃ | 5 دقائق | 1 | التمديد النهائي |
ملاحظة: الإجراء أعلاه هو للإشارة فقط.تختلف ظروف التفاعل الفعلية اعتمادًا على الظروف الهيكلية للقالب ، والبادئات ، وما إلى ذلك. بالنسبة لقوالب الحمض النووي الريبي ذات الهياكل الثانوية المعقدة ، يوصى بأن تكون درجة حرارة التفاعل للخطوة الأولى من النسخ العكسي 50 درجة مئوية.في العملية المحددة ، من الضروري تصميم ظروف التفاعل المثلى ، بما في ذلك درجة حرارة التلدين ، ووقت التمديد ، وما إلى ذلك وفقًا للظروف المحددة لحجم الجزء المستهدف ، والتسلسل الأساسي للجزء المضخم ، ومحتوى GC وطول التمهيدي.
مخطط عملية RT-PCR
Foregene Reverse Transcriptase
يمكن أن يوفر إنزيم النسخ العكسي Foregene رد فعل نسخ عكسي عالي الكفاءة ومحددًا.يُظهر النسخ العكسي تقاربًا كبيرًا ولا يزال يحافظ على نشاط النسخ العكسي الجيد عند درجة حرارة تفاعل تبلغ 50 درجة مئوية.يمكنه عكس نسخ الحمض النووي الريبي ببنية ثانوية معقدة لا تستطيع النسخ العكسية الأخرى التعامل معها.يحتوي Foregene Reverse Transcriptase على حساسية عالية ويمكن تطبيقه في مجموعة واسعة من كميات الحمض النووي الريبي (0.1pgRNA≤1μg).
Foregene HotStar Taq DNA Polymerase
يوفر تضخيمًا محددًا للغاية لـ PCR.عندما يكون النسخ العكسي قيد التقدم ، يكون بوليميريز الحمض النووي غير فعال تمامًا ولا يعيق تفاعل النسخ العكسي.بعد تسخين برنامج تفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) ، يتم تسخينه إلى 94 درجة مئوية ، يتم تنشيط بوليميريز الحمض النووي ويتم تعطيل إنزيم النسخ العكسي.تعمل عملية البدء الساخن على التخلص من تكوين البادئات الصلبة غير المحددة والثنايات الأولية في الدورة الأولى ، مما يضمن خصوصية عالية وموثوقية تضخيم PCR.
حذر:(يرجى قراءة الاحتياطات بعناية قبل استخدام المجموعة)
- يجب أن تتجنب الكواشف التجميد والذوبان المتكرر ، وإلا فإن أداء الكواشف سينخفض أو يصبح غير صالح.
- يوصى باستخدام استخراج عينة طازجة أو قالب RNA مخزن عند -80 درجة مئوية (يجب أن يتجنب الحمض النووي الريبي تكرار التجميد والذوبان).
- من أجل تجنب تلوث RNase ، يجب إجراء العملية التجريبية في مساحة خالية من RNase ؛يجب أن تكون أطراف الماصة وأنابيب PCR خالية من RNase ؛ويجب ارتداء القفازات والأقنعة التي تستخدم لمرة واحدة.
- يجب استخدام هذه المجموعة مع بادئات محددة لإجراء التجارب.يرجى تحديد البادئات المحددة للجين المراد تضخيمه وفقًا لاحتياجات التجربة.
- قبل الاستخدام ، ضع 2 × RT-PCR EasyTMيُمزج المزيج على الجليد ليذوب تمامًا ، ثم يُنفض ويخلط جيدًا قبل الاستخدام ؛يجب تشغيل إعداد النظام على حمام جليدي لتحسين أداء المجموعة وخصوصية تضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل.
يوصى بشدة أن يقرأ المستخدمون التعليمات بعناية قبل استخدام هذه المجموعة.RT-qPCR سهلTMII (خطوة واحدة) - تقييمان بسيط ومريح وسريع التشغيل.يوفر دليل التعليمات الاستخدام الصحيح للمجموعة بأكملها.يرجى إعداد المواد والمعدات التجريبية اللازمة قبل الاستخدام.
RT-qPCR سهلTM(خطوة واحدة) -تقمان: (1pg-100ng إجمالي RNA) / نظام 20μl
- أداة تضخيم PCR الكمي الإسفار
- ماصة صغيرة وطرف خالٍ من RNase
- حمام الثلج
- قالب RNA
- بادئات PCR محددة الجينات
- هذا المنتج مخصص للاستخدام في البحث العلمي فقط ، يرجى عدم استخدامه في الطب والطب السريري والأغذية ومستحضرات التجميل.
- ارتداء ملابس المختبر المناسبة والقفازات والنظارات الواقية وما إلى ذلك عند استخدام المواد الكيميائية.
فيما يلي تحليل للمشكلات التي يمكن مواجهتها في الاستخدام العملي لمجموعات سلسلة RT-PCR Easy ، ونأمل أن يكون ذلك مفيدًا لتجربتك.بالإضافة إلى ذلك ، بالنسبة للمشكلات التجريبية أو التقنية الأخرى بخلاف تعليمات التشغيل والمشكلات ، فقد خصصنا الدعم الفني لمساعدتك.إذا كان لديك أي احتياجات ، يرجى الاتصال بنا: 028-83360257 أو البريد الإلكتروني:Tech@foregene.com.
1. تدهور قالب الحمض النووي الريبي
التوصيات: استخدام عينات جديدة لاستخراج واستخدام RNA عالي الجودة وعالي النقاء (يوصى باستخدام سلسلة Foregene Total RNA Isolation Kit
استخراج وتنقية الحمض النووي الريبي (RNA) ؛يجب أن يتجنب الحمض النووي الريبي المخزن عند -80 التجميد المتكرر و
الذوبان.
2. يحتوي الحمض النووي الريبي على مثبطات
توصية: تشتمل مثبطات النسخ العكسي عمومًا على SDS ، وملح الجوانيدين ، و EDTA ، وما إلى ذلك. يوصى بتنظيف راسب الحمض النووي الريبي باستخدام 70٪ من الإيثانول لإزالة المانع ؛أو استخدم سلسلة Foregene Total RNA Isolation Kit لاستخراج وتنقية الحمض النووي الريبي.
3. قضايا التصميم التمهيدي
توصية: وفقًا لمبدأ التصميم التمهيدي ، أعد تصميم التمهيدي للفحص.
1. تلوث الحمض النووي الجيني في الحمض النووي الريبي.
توصية: استخدم DNase I من فئة التضخيم للعلاج ، وقم بإعداد عنصر تحكم دون النسخ العكسي للكشف عن تلوث الحمض النووي.
2. ال Mg2+التركيز غير مناسب.
التوصية: تركيز Mg2 + في المزيج الذي نقدمه هو 3.5 ملي مولار.ومع ذلك ، بالنسبة لبعض البادئات والقوالب الخاصة ، قد تكون هناك حاجة إلى تركيز أعلى من Mg2 + ، لذلك يمكن إضافة MgCl2 مباشرة لتحسين Mg2+تركيز.يوصى بإضافة 0.5 مللي M Mg2 + في كل مرة للتحسين.
3. درجة حرارة التلدين PCR منخفضة للغاية.
اقتراح: هل التدرج PCR للاشعال واختيار درجة حرارة التلدين المناسبة.
4. منتج PCR طويل جدًا.
توصية: يفضل أن يتراوح طول منتج PCR الكمي الفلوري بين 100-300 نقطة أساس.
5. يحدث تحلل في البرايمر ، وسيؤدي تدهور التمهيدي إلى ظهور تضخيم غير محدد.
اقتراح: استخدم الرحلان الكهربائي SDS-PAGE لاكتشاف ما إذا كانت البادئات متدهورة ، واستبدلها بأجهزة أولية جديدة للتجربة.
6. نظام PCR غير صحيح ، أو أن النظام صغير جدًا.
اقتراح: نظام تفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل صغير جدًا سيؤدي إلى تقليل دقة الكشف.من الأفضل إجراء التجربة مرة أخرى باستخدام نظام التفاعل الموصى به بواسطة أداة PCR الكمية.
7. دورات PCR كثيرة جدًا.
توصية: تقليل عدد دورات PCR بشكل مناسب.
1. يوجد عدد كبير من مثبطات الإنزيم في قالب الحمض النووي الريبي.اقتراح: أعد تنشيط النموذج أو قلل من كمية النموذج المستخدم.
2. شروط تضخيم PCR غير مناسبة ، تسلسل التمهيدي أو التركيز غير مناسب.
اقتراح: تأكد من صحة تسلسل التمهيدي ولم يتحلل التمهيدي ؛إذا كانت إشارة التضخيم غير جيدة ، فحاول خفض درجة حرارة التلدين وضبط تركيز التمهيدي بشكل مناسب.
3. حجم القالب قليل جدًا أو كثير جدًا.
توصية: قم بإجراء تخفيف التدرج الخطي للقالب ، وحدد تركيز القالب مع أفضل تأثير PCR للتجارب الكمية الفلورية.
1. تسبب التلوث الكاشف أثناء العملية.
توصية: الاستبدال بكواشف جديدة لتجارب RT-PCR.
2. حدث تلوث أثناء تحضير نظام تفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل.توصية: اتخذ التدابير الوقائية اللازمة أثناء التشغيل ، مثل: ارتداء قفازات من اللاتكس ، واستخدام طرف ماصة مزود بفلتر ، وما إلى ذلك.
3. تحلل المواد الأولية ، وسيؤدي تحلل المواد الأولية إلى تضخيم غير محدد.
اقتراح: استخدم الرحلان الكهربائي SDS-PAGE لاكتشاف ما إذا كانت البادئات متدهورة ، واستبدلها بأجهزة أولية جديدة لتجارب RT-PCR.
1. الجهاز معطل.
اقتراح: قد تكون هناك أخطاء بين كل ثقب PCR لجهاز PCR ، مما يؤدي إلى ضعف التكاثر أثناء إدارة درجة الحرارة أو الكشف.
يرجى إجراء الاختبار وفقًا لتعليمات الجهاز المقابل.
2. نقاء العينة ليس جيدًا.
توصية: ستؤدي العينات غير النقية إلى ضعف استنساخ التجربة ، والذي يتضمن نقاء القالب والبادئات.من الأفضل إعادة ترطيب القالب ، ويتم تنقية المواد الأولية بشكل أفضل بواسطة SDS-PAGE.
3. وقت إعداد وتخزين نظام PCR طويل جدًا.
اقتراح: استخدم نظام RT-PCR لتجارب تفاعل البوليميراز المتسلسل مباشرة بعد التحضير ، ولا تتركه لفترة طويلة ؛يوصى بإعداد برنامج PCR قبل متابعة إعداد نظام RT-PCR.
4. شروط تضخيم PCR غير مناسبة ، وتسلسل التمهيدي أو التركيز غير مناسب.
اقتراح: تأكد من صحة تسلسل التمهيدي ولم يتحلل التمهيدي ؛عندما لا تكون إشارة التضخيم جيدة ، حاول ضبط درجة حرارة التلدين وضبط تركيز التمهيدي بشكل مناسب.
اتصل شخص: Maggie
الهاتف :: +8615281067355
