RT-QPCR EasyTM (خطوة واحدة) - Taqman Cat.No.RT-02131/02132 مع Taq DNA Polymerase

RT-qPCR EasyTM (خطوة واحدة) - Taqman Cat.No.RT-02131/02132 مزيج رئيسي من خطوة واحدة في الوقت الحقيقي RT-PCR مع Taq DNA Polymerase

RT-PCR EasyTM I (خطوة واحدة)

Cat.No.RT-02011/02012

خطوة واحدة RT-PCR Master Mix

للاستخدام البحثي فقط

تخزينها في -20 درجة مئوية

مقدمة المنتج

تدرك منتجات سلسلة Foregene One-Step RT-PCR EasyTM التفاعل المتكامل من RNA إلى الحمض النووي مزدوج الشريطة ، أي اكتمال النسخ العكسي وتضخيم PCR في نفس أنبوب الطرد المركزي ونفس نظام التفاعل ، مما يبسط الخطوات التجريبية ، يحسن البرنامج التجريبي ، ويحسن كفاءة التجربة.

RT-PCR EasyTM I (One Step) عبارة عن مجموعة RT-PCR من خطوة واحدة تم تطويرها خصيصًا بواسطة Foregene ، والتي تحقق التشغيل المستمر من RT إلى PCR في نفس الأنبوب.العملية بسيطة وسريعة ، والتي يمكن أن تقلل التلوث بشكل فعال أثناء التجربة.تتميز 2 × RT-PCR EasyTM Mix بقدرة تحمل عالية واستقرار حراري وكفاءة عالية وخصوصية للتضخيم.

سمات

تتيح المجموعة المكونة من خطوة واحدة إجراء النسخ العكسي و PCR في نفس الأنبوب.يحتاج فقط إلى إضافة قالب RNA ، وأشعال PCR محددة و RNase-Free ddH2O.

يمكن إجراء التحليل الكمي في الوقت الحقيقي للـ RNA بسرعة وبدقة.

تستخدم المجموعة كاشف النسخ العكسي الفريد Foregene و Foregene HotStar Taq DNA Polymerase جنبًا إلى جنب مع نظام تفاعل فريد لتحسين كفاءة التضخيم وخصوصية التفاعل بشكل فعال.

يجعل نظام التفاعل المُحسَّن التفاعل يتمتع بحساسية أعلى للكشف ، واستقرار حراري أقوى ، وتحمل أفضل.

مراقبة جودة المنتج

وفقًا لنظام إدارة الجودة الشاملة FOREGEN (نظام إدارة الجودة الشاملة لشركة FOREGENE) ، فإن كل دفعة من RT-PCR Easy^TMيتم اختبار مجموعات (خطوة واحدة) بشكل صارم عدة مرات لضمان الجودة والموثوقية والاستقرار لكل مجموعة مجموعات.

محتويات المجموعة

شروط النقل والتخزين

1- شروط النقل

العملية الكاملة لنقل صندوق الثلج بدرجة حرارة منخفضة ، للتأكد من أن المجموعة في حالة أقل من 4 درجات مئوية.

2. شروط التخزين

يتم تخزين RT EasyTM I في درجة حرارة -20 درجة مئوية.قم بتخزين المنتج في ثلاجة بدرجة حرارة ثابتة عند -20 درجة مئوية مباشرة بعد الاستلام.إذا كانت ظروف التخزين مناسبة ، فلن يؤدي المنتج إلى تدهور أي أداء خلال فترة الصلاحية التي تبلغ 1 عام.

معلومات مكون الطقم

2 × RT-PCR EasyTM Mix: Foregene Reverse Transcriptase ، RNase Inhibitor ، Foregene HotStar Taq DNA Polymerase ، dNTPs ، Mg2 + ، مخزن مؤقت للتفاعل ، محسن ومثبت ، إلخ.

احتياطات:(يرجى قراءة الاحتياطات بعناية قبل استخدام المجموعة)

بالنسبة للقوالب ، يوصى باستخدام الحمض النووي الريبي المستخرج من العينات الطازجة أو المخزنة عند -80 درجة مئوية (يجب تجنب تكرار التجميد والذوبان).

من أجل تجنب تلوث RNase ، يجب إجراء العملية التجريبية في مساحة خالية من RNase ؛يجب أن تكون أطراف الماصة وأنابيب الطرد المركزي PCR خالية من RNase ؛ويجب ارتداء القفازات والأقنعة التي تستخدم لمرة واحدة.قبل الاستخدام ، ضعي 2 × RT-PCR EasyTM Mix على الجليد ليذوب تمامًا ونفض الغبار وخلط جيدًا قبل الاستخدام ؛يجب تشغيل إعداد النظام على حمام جليدي لتحسين أداء المجموعة وخصوصية تضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل.

تركيز قالب الحمض النووي الريبي

RT-PCR EasyTM I (خطوة واحدة) :( 0.1pg-1μg إجمالي RNA) / نظام 20μl

تطبيق كيت

- تُستخدم هذه المجموعة للكشف السريع عن الجينات عالية النسخ ومنخفضة النسخ.

- مناسب بشكل خاص للكشف السريع عن قوالب الحمض النووي الريبي ذات المحتوى العالي من GC أو البنية الثانوية المعقدة.

مراقبة جودة المنتج

وفقًا لنظام إدارة الجودة الشاملة FOREGEN (نظام إدارة الجودة الشاملة لشركة FOREGENE) ، فإن كل دفعة من RT-PCR Easy^TMيتم اختبار مجموعات (خطوة واحدة) بشكل صارم عدة مرات لضمان الجودة والموثوقية والاستقرار لكل مجموعة مجموعات.

دليل العمليه

ج: تحضير المواد والكواشف

1. إعداد قالب الحمض النووي الريبي المحضر (من المستحسن استخدام مجموعات سلسلة Foregene Total RNA Isolation Kit لاستخراج وتنقية الحمض النووي الريبي) ، وأشعال محددة (10 ميكرومتر) والمواد الاستهلاكية والأدوات ذات الصلة.

ملاحظة: يرجى التأكد من سلامة الحمض النووي الريبي ومحاولة استخدام الحمض النووي الريبي المستخرج من عينات جديدة.

2. ضع 2 × RT-PCR EasyTM Mix و RNase-Free ddH2O في حمام جليدي للسماح له بالذوبان بشكل طبيعي ، ثم حرك جدار الأنبوب لخلطه جيدًا لاستخدامه لاحقًا.

ب: إعداد نظام RT-PCR

2 × RT-PCR EasyTM Mix مريحة وسريعة الاستخدام ، وتجنب التلوث أثناء التشغيل والأخطاء التجريبية التي تسببها الاستعدادات المتعددة لنظام التفاعل إلى أقصى حد.عند الاستخدام ، نصف حجم نظام التفاعل فقط (على سبيل المثال ، إذا كان نظام التفاعل 20 ميكرولتر ، خذ 10 مايكرولتر 2 × RT-PCR EasyTM Mix) ، أضف كمية مناسبة من قالب RNA وأشعال محددة ، وأضف RNase-Free ddH2O لتشكيل الحجم.الرجوع إلى الجدول 1 أدناه لإعداد نظام رد فعل RT-PCR المحدد.

النموذج 1: إعداد نظام RT-PCR

1 *: عادة ما يكون التركيز النهائي للبرايمر هو 0.2-0.25 ميكرومتر للحصول على نتائج أفضل.عندما يكون أداء التفاعل ضعيفًا ، يمكن ضبط تركيز التمهيدي في نطاق 0.1-0.5 ميكرومتر.

ملحوظة: Forward Primer و Reverse Primer هما البرايمر المحدد للجين المستهدف ؛نظام 50 مايكرولتر ، يرجى الرجوع إلى نظام 20 ميكرولتر لضبط جرعة الكاشف بشكل متناسب.

ج: إعداد برنامج تفاعل RT-PCR

• بعد تحضير نظام RT-PCR بالرجوع إلى الجدول أعلاه ، اخلط بلطف (يمكنك استخدام طرف الماصة لتنفخ بلطف ؛ يمكنك أيضًا المزج على دوامة وجهاز طرد مركزي لفترة وجيزة لتجميع السائل المتناثر على جدار الأنبوب أو غطاء الأنبوب ، و ضعها في صندوق ثلج لاستخدامها لاحقًا).

2. الرجوع إلى إعدادات برنامج تفاعل RT-PCR (الجدول 2) لضبط درجة الحرارة ووقت التفاعل.

ملاحظة: من أجل ضمان نشاط 2 × RT-PCR EasyTM Mix وتحسين كفاءة التضخيم ، فمن الأفضل تحضير نظام تفاعل RT-PCR بعد ضبط برنامج أداة PCR ، بحيث يمكن إدخال برنامج التفاعل فورًا بعد ذلك. النظام جاهز.

النموذج 2: إعداد نظام تفاعل RT-PCR

ملاحظة: الإجراء أعلاه هو للإشارة فقط.تختلف ظروف التفاعل الفعلية اعتمادًا على الظروف الهيكلية للقالب ، والبادئات ، وما إلى ذلك. بالنسبة لقوالب الحمض النووي الريبي ذات الهياكل الثانوية المعقدة ، يوصى بأن تكون درجة حرارة التفاعل للخطوة الأولى من النسخ العكسي 50 درجة مئوية.في العملية المحددة ، من الضروري تصميم ظروف التفاعل المثلى ، بما في ذلك درجة حرارة التلدين ، ووقت التمديد ، وما إلى ذلك وفقًا للظروف المحددة لحجم الجزء المستهدف ، والتسلسل الأساسي للجزء المضخم ، ومحتوى GC وطول التمهيدي.
مخطط عملية RT-PCR

Foregene Reverse Transcriptase

يمكن أن يوفر إنزيم النسخ العكسي Foregene رد فعل نسخ عكسي عالي الكفاءة ومحددًا.يُظهر النسخ العكسي تقاربًا كبيرًا ولا يزال يحافظ على نشاط النسخ العكسي الجيد عند درجة حرارة تفاعل تبلغ 50 درجة مئوية.يمكنه عكس نسخ الحمض النووي الريبي ببنية ثانوية معقدة لا تستطيع النسخ العكسية الأخرى التعامل معها.يحتوي Foregene Reverse Transcriptase على حساسية عالية ويمكن تطبيقه في مجموعة واسعة من كميات الحمض النووي الريبي (0.1pgRNA≤1μg).

Foregene HotStar Taq DNA Polymerase

يوفر تضخيمًا محددًا للغاية لـ PCR.عندما يكون النسخ العكسي قيد التقدم ، يكون بوليميريز الحمض النووي غير فعال تمامًا ولا يعيق تفاعل النسخ العكسي.بعد تسخين برنامج تفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) ، يتم تسخينه إلى 94 درجة مئوية ، يتم تنشيط بوليميريز الحمض النووي ويتم تعطيل إنزيم النسخ العكسي.تعمل عملية البدء الساخن على التخلص من تكوين البادئات الصلبة غير المحددة والثنايات الأولية في الدورة الأولى ، مما يضمن خصوصية عالية وموثوقية تضخيم PCR.

حذر:(يرجى قراءة الاحتياطات بعناية قبل استخدام المجموعة)

- يجب أن تتجنب الكواشف التجميد والذوبان المتكرر ، وإلا فإن أداء الكواشف سينخفض ​​أو يصبح غير صالح.

- يوصى باستخدام استخراج عينة طازجة أو قالب RNA مخزن عند -80 درجة مئوية (يجب أن يتجنب الحمض النووي الريبي تكرار التجميد والذوبان).

- من أجل تجنب تلوث RNase ، يجب إجراء العملية التجريبية في مساحة خالية من RNase ؛يجب أن تكون أطراف الماصة وأنابيب PCR خالية من RNase ؛ويجب ارتداء القفازات والأقنعة التي تستخدم لمرة واحدة.

- يجب استخدام هذه المجموعة مع بادئات محددة لإجراء التجارب.يرجى تحديد البادئات المحددة للجين المراد تضخيمه وفقًا لاحتياجات التجربة.

- قبل الاستخدام ، ضع 2 × RT-PCR Easy^TMيُمزج المزيج على الجليد ليذوب تمامًا ، ثم يُنفض ويخلط جيدًا قبل الاستخدام ؛يجب تشغيل إعداد النظام على حمام جليدي لتحسين أداء المجموعة وخصوصية تضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل.