شركة Foregene المحدودة
الصين للأبد ، العالم أجمع!
 |
| مكان المنشأ: | الصين |
| اسم العلامة التجارية: | FOREGENE |
| إصدار الشهادات: | ISO CE |
| رقم الموديل: | RT-02111 |
| الحد الأدنى لكمية: | 1 أطقم |
|---|---|
| الأسعار: | 186 usd per kit |
| تفاصيل التغليف: | التعبئة مع الكرتون العابر الآمن |
| وقت التسليم: | 7 أيام عمل |
| شروط الدفع: | L / C ، D / A ، D / P ، T / T ، ويسترن يونيون |
| القدرة على العرض: | 10000 مجموعة شهريا |
| اسم المنتج: | RT-qPCR EasyTM (خطوة واحدة) -SYBR Green I Cat.No.RT-02111/02112 خطوة واحدة في الوقت الحقيقي RT-PCR M | طلب: | لرد فعل qPCR |
|---|---|---|---|
| التعبئة: | 100 rxns لكل مجموعة | موك: | 1 أطقم |
| موعد التسليم: | 7 أيام عمل | ماركة: | فورجين |
| خدمة صانعي القطع الاصلية: | وافقت | ||
| تسليط الضوء: | RT-QPCR EasyTM SYBR,Real Time RT PCR Master Mix |
||
RT-qPCR EasyTM (خطوة واحدة) -SYBR Green I
كات رقم RT-02111/02112
مزيج رئيسي RT-PCR من خطوة واحدة في الوقت الحقيقي
للاستخدام البحثي فقط
تخزينها في -20 درجة مئوية
RT-qPCR EasyTM (خطوة واحدة) -SYBR Green I يستخدم نظامًا فريدًا للجمع بشكل فعال بين تفاعلات RT و Real Time PCR ، والتي يمكن أن تكمل الاكتشاف الكمي للجينات بسرعة.المنتج لديه تسامح قوي وخصوصية عالية واستقرار.يحتوي المنتج على شركة Foregene HotStar Taq DNA Polymerase الفريدة من نوعها ، والتي تتميز بمزايا التضخيم السريع (2Kb / min) ، وكفاءة التضخيم العالية ، والقدرة القوية على التضخيم النوعي ، ومعدل عدم التطابق المنخفض مقارنةً بإنزيمات Taq العادية.يتم استخدامه هنا لـ Real Time RT-PCR لتقليل التضخيم غير المحدد وتحسين دقة PCR.
تقوم المجموعة المكونة من خطوة واحدة بإجراء النسخ العكسي وتفاعلات qPCR في نفس الأنبوب ، وتحتاج فقط إلى إضافة قالب RNA ، وأشعال PCR محددة و ddH2O الخالي من RNase.
يمكن للمجموعة أن تحلل بسرعة وكفاءة الحمض النووي الريبي الفيروسي أو تتبع الحمض النووي الريبي.
تستخدم المجموعة كاشف النسخ العكسي الفريد Foregene و Foregene HotStar Taq DNA Polymerase جنبًا إلى جنب مع نظام تفاعل فريد لتحسين كفاءة التضخيم وخصوصية التفاعل بشكل فعال.
يجعل نظام التفاعل المُحسَّن التفاعل يتمتع بحساسية أعلى للكشف ، واستقرار حراري أقوى ، وتحمل أفضل.
تأتي مجموعة RT-qPCR EasyTM (خطوة واحدة) -SYBR Green I مع صبغة مرجعية داخلية ROX ، والتي يمكن استخدامها للتخلص من خلفية الإشارة وأخطاء الإشارة بين الآبار ، وهو أمر مناسب للعملاء لاستخدامها في نماذج مختلفة من أدوات PCR الكمية.
| RT-qPCR EasyTM (خطوة واحدة) -SYBR Green I | ||
| محتويات المجموعة | RT-02111 | RT-02112 |
| 100T (نظام 20 مايكرولتر) | 500T (نظام 20 مايكرولتر) | |
| 2 × RT-qPCR EasyTM Mix-SYBR | 1 مل | 1.7 مل × 3 |
| 50 × صبغة مرجعية ROX | 200 ميكرولتر | 1 مل |
| RNase خالية من ddH2O | 1.7 مل | 1.7 مل × 3 |
| كتيب التعليمات | 1 قطعة | 1 قطعة |
1- شروط النقل
العملية الكاملة لنقل صندوق الثلج بدرجة حرارة منخفضة ، للتأكد من أن المجموعة في حالة أقل من 4 درجات مئوية.
2. شروط التخزين
2 × RT-qPCR EasyTM Mix-SYBR: Foregene Reverse Transcriptase ، RNase Inhibitor ، Foregene HotStar Taq DNA Polymerase ، النسبة المثلى من dNTPs ، SYBR GreenI ، Mg2 + ، المثبتات ، المعززات ، والمحسنات.
صبغة مرجعية ROX: تُستخدم عمومًا في مكبرات صوت تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي لشركات مثل ABI و Stratagene لضبط الاختلاف بين أنابيب وأنابيب PCR الناتجة عن أخطاء تحميل عينة PCR.يختلف تركيز الصبغة المرجعية ROX التي تتطلبها الأدوات المختلفة ، ويمكن للمستخدم إضافتها وفقًا للتركيز الموصى به للأداة.
الاحتياطات: (يرجى قراءة الاحتياطات بعناية قبل استخدام المجموعة)
يجب أن تتجنب الكواشف التجميد والذوبان المتكرر ، وإلا فإن أداء الكواشف سينخفض أو يصبح غير صالح.
يجب حماية الكواشف الموجودة في المجموعة من الضوء وتخزينها في درجة حرارة -20 درجة مئوية.
من المستحسن استخدام استخراج عينة جديدة أو قالب RNA المخزن في -80 درجة مئوية (يجب تجنب RNA تكرار التجميد والذوبان).
من أجل تجنب تلوث RNase ، يرجى إجراء التجربة في الفضاء الخالي من RNase ؛يجب أن تكون أطراف الماصة وأنابيب PCR خالية من RNase ؛وارتداء القفازات والأقنعة التي تستخدم لمرة واحدة.
يجب استخدام هذه المجموعة مع بادئات محددة لإجراء التجارب.يرجى تحديد البادئات المحددة للجين المراد تضخيمه وفقًا لاحتياجات التجربة.
قبل الاستخدام ، ضع 2 × RT-qPCR EasyTM Mix-SYBR I على الجليد ليذوب تمامًا ونفض الغبار وخلط جيدًا قبل الاستخدام ؛يجب تشغيل إعداد النظام على حمام جليدي لتحسين أداء المجموعة وزيادة خصوصية تضخيم PCR.
2 × RT-qPCR EasyTM Mix-SYBR تحتوي على SYBR Green I ، يرجى تجنب الضوء القوي.
RT-qPCR EasyTM (خطوة واحدة) -SYBR Green I: (0.1pg-100ng إجمالي RNA) / نظام 20μl.
ج: تحضير المواد والكواشف
1. إعداد قالب الحمض النووي الريبي المحضر (من المستحسن استخدام مجموعات سلسلة Foregene Total RNA Isolation Kit لاستخراج وتنقية الحمض النووي الريبي) ، وأشعال محددة (10 ميكرومتر) والمواد الاستهلاكية والأدوات ذات الصلة.
ملاحظة: يرجى التأكد من سلامة الحمض النووي الريبي ومحاولة استخدام الحمض النووي الريبي المستخرج من عينات جديدة.
2. ضع 2 × RT-qPCR EasyTM Mix-SYBR و RNase-Free ddH2O و 50 × ROX Reference Dye (إذا لزم الأمر) على الجليد لتتركه تذوب بشكل طبيعي ، ثم حرك جدار الأنبوب لخلط حتى الاستخدام.
ب: إعداد نظام RT-qPCR
2 × RT-qPCR EasyTM Mix-SYBR مريحة وسريعة الاستخدام ، وتتجنب التلوث أثناء التشغيل والأخطاء التجريبية التي تسببها الاستعدادات المتعددة لنظام التفاعل إلى أقصى حد.عند الاستخدام ، نصف حجم نظام التفاعل فقط (على سبيل المثال ، إذا كان نظام التفاعل 20 ميكرولتر ، خذ 10 ميكرولتر 2 × RT-qPCR Easy TM Mix-SYBR) ، أضف قالب RNA وأشعال محددة ، وأضف ddH2O الخالي من RNase إلى تشكل الحجم.الرجوع إلى الجدول 1 أدناه لإعداد نظام رد فعل RT-qPCR المحدد
النموذج 1: إعداد نظام RT-qPCR
| إضافات نظام RT-qPCR | مقدار | التركيز النهائي |
| 2 × RT-qPCR EasyTM Mix-SYBR | 10 ميكرولتر | 1 × |
| التمهيدي الأمامي (10 ميكرومتر) | 0.5 ميكرولتر | 0.2-0.25 ميكرومتر 1 * |
| عكس التمهيدي (10 ميكرومتر) | 0.5 ميكرولتر | 0.2-0.25 ميكرومتر 1 * |
| قالب (RNA) | Xμl | 0.1pg-100ng |
| 50 × صبغة مرجعية ROX | - | 2 * |
| RNase-FreeddH2O | (9 ×) ميكرولتر | |
| الحجم الكلي | 20 ميكرولتر |
1 *: عادة ما يكون التركيز النهائي للبرايمر هو 0.2-0.25 ميكرومتر للحصول على نتائج أفضل.عندما يكون أداء التفاعل ضعيفًا ، يمكن ضبط تركيز التمهيدي في نطاق 0.1-0.5 ميكرومتر.
ملحوظة: Forward Primer و Reverse Primer عبارة عن بادئات محددة للجين المستهدف.
2 *: اختر التركيز النهائي المناسب للصبغة المرجعية ROX وفقًا لأدوات PCR الكمية المختلفة.يظهر التركيز الأمثل للصبغة المرجعية ROX لأجهزة PCR الكمية الشائعة في الجدول التالي:
| أداة PCR الكمي | التركيز النهائي لصبغة ROX المرجعي |
| ABI PRISM 7000/7300/7700 / 7900HT / الخطوة الأولى إلخ. | 5 × (نظام ie20 مايكرولتر ، أضف 2 مايكرولتر 50 × صبغة مرجعية ROX) |
| ABI 7500،7500 Fast و Stratagene Mx3000P و Mx3005P و Mx4000 ، إلخ. | 1 × (نظام ie20 مايكرولتر ، أضف 0.4 مايكرولتر 50 × صبغة مرجعية ROX) |
| جهاز Roche PCR ، جهاز Bio-Rad PCR ، جهاز Eppendorf الكمي PCR ، إلخ. | لا حاجة لإضافة صبغة مرجعية ROX |
C: إعداد نظام رد فعل RT-qPCR
2. الرجوع إلى إعدادات برنامج رد فعل RT-qPCR (الجدول 2) لضبط درجة الحرارة ووقت التفاعل.
ملاحظة: من أجل ضمان نشاط 2 × RT-qPCR EasyTM Mix-SYBR وتحسين كفاءة التضخيم ، فمن الأفضل إعداد نظام رد فعل RT-qPCR بعد إعداد برنامج أداة PCR ، بحيث يمكن أن يكون برنامج التفاعل تم إدخالها فور اكتمال إعداد النظام.
3. من أجل الحصول على أفضل تأثير qPCR ، يمكن استخدام التدرج PCR لتحسين ظروف التفاعل لقوالب مختلفة وأشعال مختلفة.
ملاحظة: نطاق درجة حرارة التمديد لـ Foregene Hotstar Taq DNA Polymerase المتوفرة في هذه المجموعة: 60-72 ℃ ، وأفضل درجة حرارة تمديد هي 72 ℃.
فيما يلي مثال على شروط تفاعل RT-qPCR.يوصى باستخدام طريقة من خطوتين لتفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل.عندما يكون تركيز القالب منخفضًا جدًا بحيث لا يتسبب في تضخيم غير محدد ، تؤدي قيمة التمهيدي المنخفضة Tm إلى كفاءة تضخيم منخفضة أو ضعف تكرار منحنى التضخيم ، وما إلى ذلك ، يوصى بتجربة طريقة الخطوات الثلاث لتفاعل PCR.ارجع إلى الجدول 2-1 (طريقة من خطوتين) والجدول 2-2 (طريقة من ثلاث خطوات) لتحديد شروط تفاعل RT-qPCR.
النموذج 2-1: إعداد برنامج رد الفعل RT-qPCR (خطوتين)
| خطوة | درجة الحرارة | زمن | دورة | محتوى |
| 1 | 42 ℃ | 10-30 دقيقة 1 * | 1 | النسخ العكسي |
| 2 | 94-95 | 5 دقائق | 1 | قبل التمسخ |
| 3 | 94-95 | 10 ثوانى | 30-45 | تمسخ القالب أثناء الدورات |
| 60-65 | 20 ثانية 2 * | التلدين / التمديد |
النموذج 2-2: إعداد برنامج رد فعل RT-qPCR (ثلاث خطوات)
| خطوة | درجة الحرارة | زمن | دورة | محتوى |
| 1 | 42 ℃ | 10-30 دقيقة 1 * | 1 | النسخ العكسي |
| 2 | 94-95 | 5 دقائق | 1 | قبل التمسخ |
| 3 | 94-95 | 10 ثوانى | 30-45 | تمسخ القالب أثناء الدورات |
| 55-65 | 20 ثانية | التلدين التمهيدي | ||
| 72 ℃ | 20-30 ثانية 2 * | امتداد |
1 *: يمكن تعديل وقت النسخ العكسي وفقًا للاحتياجات التجريبية.تحتاج الجينات الداخلية العامة مثل β-Actin إلى 10 دقائق فقط ؛للكشف عن جينات معينة معبرة ، يمكن تمديد وقت النسخ العكسي بشكل مناسب حسب الحاجة.
2 *: اضبط وقتًا محددًا وفقًا لطول جزء الهدف المضخم.تبلغ سرعة التضخيم لـ Foregene HotStar Taq DNA Polymerase 2kb / min.
ملاحظة: تختلف ظروف تفاعل PCR اعتمادًا على الظروف الهيكلية للقالب ، والبادئات ، وما إلى ذلك. بالنسبة لقوالب RNA ذات الهياكل الثانوية المعقدة ، يوصى باستخدام 42 ℃ للخطوة الأولى للنسخ العكسي.في العملية المحددة ، من الضروري تصميم ظروف التفاعل المثلى وفقًا للظروف المحددة مثل حجم الجزء المستهدف ، والتسلسل الأساسي للجزء المضخم ومحتوى GC وطول التمهيدي ، بما في ذلك درجة حرارة التلدين ، والتمديد الوقت ، إلخ.
احتياطات:(يرجى قراءة الاحتياطات بعناية قبل استخدام المجموعة)
- يجب أن تتجنب الكواشف التجميد والذوبان المتكرر ، وإلا فإن أداء الكواشف سينخفض أو يصبح غير صالح.
- يجب حماية الكواشف الموجودة في المجموعة من الضوء وتخزينها في درجة حرارة -20 درجة مئوية.
- يوصى باستخدام استخراج عينة طازجة أو قالب RNA مخزّن في درجة حرارة -80 درجة مئوية (يجب أن يتجنب الحمض النووي الريبي تكرار التجميد والذوبان).
- من أجل تجنب تلوث RNase ، يرجى إجراء التجربة في الفضاء الخالي من RNase ؛يجب أن تكون أطراف الماصة وأنابيب PCR خالية من RNase ؛وارتداء القفازات والأقنعة التي تستخدم لمرة واحدة.
- يجب استخدام هذه المجموعة مع بادئات محددة لإجراء التجارب.يرجى تحديد البادئات المحددة للجين المراد تضخيمه وفقًا لاحتياجات التجربة.
- قبل الاستخدام ، ضع 2 × RT-qPCR سهلTMMix-SYBR I على الجليد ليذوب تمامًا ونفض الغبار ويخلط جيدًا قبل الاستخدام ؛يجب تشغيل إعداد النظام على حمام جليدي لتحسين أداء المجموعة وزيادة خصوصية تضخيم PCR.
- 2 × RT-qPCR سهلTMيحتوي Mix-SYBR على SYBR Green I ، يرجى تجنب الضوء القوي.
اتصل شخص: Maggie
الهاتف :: +8615281067355
