RT-PCR EasyTM II Two Step Cat.No.RT-02021/02022 Two Step RT PCR Master Mix PCR Kits

RT-PCR EasyTM II (خطوتين) Cat.No.RT-02021/02022 Two-Step RT-PCR Master Mix PCR Kits

RT-PCR سهل^TM ثانيًا(خطوتان)

كات رقم RT-02021/02022

مزيج RT-PCR Master من خطوتين

RT-PCR EasyTM II (خطوتين)

كات رقم RT-02021/02022

مزيج RT-PCR Master من خطوتين

للاستخدام البحثي فقط

تخزينها في -20 درجة مئوية

مقدمة المنتج

يحتوي RT-PCR EasyTM II (خطوتين) على جميع الكواشف الخاصة بـ RT-PCR من خطوتين ، ويجمع بين تفاعل RT وتفاعل PCR في نفس المجموعة ، مما يوفر مزيجًا مُحسَّنًا من RT Mix و PCR Mix.يمكن لمزيج RT Mix الفريد أن يصنع (كدنا) عالي الجودة من الدرجة الأولى بسهولة وكفاءة.تتميز 2 × PCR EasyTM Mix Plus بكفاءة عالية وتضخيم محدد.الجمع العضوي بين الاثنين يجعل اكتشاف الجين المستهدف أكثر حساسية.

سمات

يمكن إجراء التحليل الكمي في الوقت الحقيقي للـ RNA بسرعة وبدقة.

تستخدم المجموعة كاشف النسخ العكسي الفريد Foregene و Foregene HotStar Taq DNA Polymerase جنبًا إلى جنب مع نظام تفاعل فريد لتحسين كفاءة التضخيم وخصوصية التفاعل بشكل فعال.

يجعل نظام التفاعل المُحسَّن التفاعل يتمتع بحساسية أعلى للكشف ، واستقرار حراري أقوى ، وتحمل أفضل.

محتويات المجموعة

شروط النقل والتخزين

1. شروط النقل

العملية الكاملة لنقل صندوق الثلج بدرجة حرارة منخفضة ، للتأكد من أن المجموعة في حالة أقل من 4 درجات مئوية.

2. شروط التخزين

مخزنة في -20 درجة مئوية.قم بتخزين المنتج في ثلاجة بدرجة حرارة ثابتة عند -20 درجة مئوية مباشرة بعد الاستلام.إذا كانت ظروف التخزين مناسبة ، فلن يؤدي المنتج إلى تدهور أي أداء خلال فترة الصلاحية التي تبلغ 1 عام.

معلومات مكون الطقم

2 × RT EasyTM Mix: Foregene Reverse Transcriptase ، RNase Inhibitor ، dNTPs ، مخزن مؤقت للتفاعل ، محسن ومثبت ، إلخ.

2 × PCR EasyTM Mix Plus: Foregene Taq DNA Polymerase و dNTPs و Mg2 + ومخزن التفاعل والمحسن والمثبت.

الاحتياطات: (يرجى قراءة الاحتياطات بعناية قبل استخدام المجموعة)

يجب أن تتجنب الكواشف التجميد والذوبان المتكرر ، وإلا فإن أداء الكواشف سينخفض ​​أو يصبح غير صالح.

بالنسبة للقوالب ، يوصى باستخدام الحمض النووي الريبي المستخرج من العينات الطازجة أو المخزنة عند -80 درجة مئوية (يجب تجنب تكرار التجميد والذوبان).

من أجل تجنب تلوث RNase ، يجب إجراء العملية التجريبية في مساحة خالية من RNase ؛يجب أن تكون أطراف الماصة وأنابيب الطرد المركزي PCR خالية من RNase ؛ويجب ارتداء القفازات والأقنعة التي تستخدم لمرة واحدة.

يجب استخدام هذه المجموعة مع بادئات محددة لإجراء التجارب.يرجى تحديد البادئات المحددة للجين المراد تضخيمه وفقًا لاحتياجات التجربة.

قبل الاستخدام ، ضع 2 × RT EasyTM Mix و 2 × PCR EasyTM Mix Plus على الجليد ليذوب تمامًا ونفض الغبار وخلط جيدًا قبل الاستخدام ؛يجب تشغيل إعداد النظام على حمام جليدي لتحسين أداء المجموعة وتحسين خصوصية تضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل.

احتياطات:(يرجى قراءة الاحتياطات بعناية قبل استخدام المجموعة)

- يجب أن تتجنب الكواشف التجميد والذوبان المتكرر ، وإلا فإن أداء الكواشف سينخفض ​​أو يصبح غير صالح.

- بالنسبة للقوالب ، يوصى باستخدام الحمض النووي الريبي المستخرج من عينات جديدة أو تخزينه عند درجة حرارة -80 درجة مئوية (يجب أن يتجنب الحمض النووي الريبي تكرار التجميد والذوبان).

- من أجل تجنب تلوث RNase ، يجب إجراء العملية التجريبية في مساحة خالية من RNase ؛يجب أن تكون أطراف الماصة وأنابيب الطرد المركزي PCR خالية من RNase ؛ويجب ارتداء القفازات والأقنعة التي تستخدم لمرة واحدة.

- يجب استخدام هذه المجموعة مع بادئات محددة لإجراء التجارب.يرجى تحديد البادئات المحددة للجين المراد تضخيمه وفقًا لاحتياجات التجربة.

- قبل الاستخدام ، ضعي 2 × RT سهل^TMامزج و 2 × PCR سهل^TMامزج بلص على الجليد ليذوب تمامًا ، ثم نفض الغبار ويخلط جيدًا قبل الاستخدام ؛يجب تشغيل إعداد النظام على حمام جليدي لتحسين أداء المجموعة وتحسين خصوصية تضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل.

تركيز قالب الحمض النووي الريبي

RT-PCR EasyTM II (خطوتين): (0.1pg-5μg إجمالي RNA) / نظام 20μl

دليل العمليه

أ -1: تحضير المواد والكواشف

1. إعداد قالب الحمض النووي الريبي المحضر (من المستحسن استخدام مجموعات سلسلة Foregene Total RNA Isolation Kit لاستخراج وتنقية الحمض النووي الريبي) ، وأشعال محددة (10 ميكرومتر) والمواد الاستهلاكية والأدوات ذات الصلة.

ملاحظة: يرجى التأكد من سلامة الحمض النووي الريبي ومحاولة استخدام الحمض النووي الريبي المستخرج من عينات جديدة.

2. ضع 2 × RT EasyTM Mix و ddH2O الخالي من RNase في حمام جليدي حتى يذوب بشكل طبيعي ، ثم حرك جدار الأنبوب لخلطه جيدًا لاستخدامه لاحقًا.

أ -2: إعداد نظام RT

2 × RT EasyTM Mix مريحة وسريعة الاستخدام ، وتجنب التلوث أثناء التشغيل والأخطاء التجريبية التي تسببها الاستعدادات المتعددة لنظام التفاعل إلى أقصى حد.عند الاستخدام ، فقط خذ نصف حجم نظام التفاعل (على سبيل المثال ، إذا كان نظام التفاعل 20 ميكرولتر ، خذ 10 مايكرولتر 2 × RT EasyTM Mix حل) ، أضف قالب RNA وأشعال النسخ العكسي ، وأضف RNase-Free ddH2O للتعويض الحجم إلى 20 ميكرولتر.يمكن أن يشير إعداد نظام تفاعل RT المحدد إلى الجدول 1 أدناه.

النموذج 1: إعداد نظام RT

أ -3: إعداد برنامج رد فعل RT

1. بعد تحضير نظام RT بالرجوع إلى الجدول أعلاه ، اخلط بلطف (يمكنك استخدام طرف ماصة لتنفخ بلطف ؛ يمكنك أيضًا مزجها على الدوامة وطردها لتجميع السائل المتناثر على جدار الأنبوب أو غطاء الأنبوب ، وضعه في جاهز للاستخدام على صندوق الثلج).

2. الرجوع إلى إعدادات برنامج رد فعل RT (الجدول 2) لضبط درجة حرارة التفاعل والوقت وما إلى ذلك.

ملاحظة: من أجل ضمان نشاط Mix وتحسين كفاءته في التضخيم ، من الأفضل تحضير نظام تفاعل RT بعد أن يصل الحمام المعدني إلى درجة حرارة التفاعل المحددة (درجة حرارة النسخ العكسي 42 ℃ أو 50) ، بحيث يمكن للنظام يتم تحضيرها فور الانتهاء من إعداد النظام.أدخل برنامج التفاعل.يمكن أيضًا إجراء تفاعل RT على جهاز PCR.

النموذج 2: إعداد برنامج رد فعل RT

ملاحظة: عند استخدام أساس عشوائي ، يجب تسخين التفاعل مسبقًا عند 25 درجة مئوية لمدة 10 دقائق قبل الخطوة الأولى من التفاعل.الإجراء أعلاه هو للإشارة فقط.تختلف ظروف التفاعل الفعلية اعتمادًا على الظروف الهيكلية للقالب ، والبادئات ، وما إلى ذلك. بالنسبة لقوالب الحمض النووي الريبي ذات النتائج الثانوية المعقدة ، يوصى بأن تكون درجة حرارة التفاعل الأولى 50 درجة مئوية.

1. يمكن استخدام منتج التفاعل مباشرة في الاختبارات اللاحقة ، أو تخزينه في درجة حرارة -20 درجة مئوية لمدة تصل إلى أسبوع.للتخزين طويل الأجل ، يوصى بتجنب التجميد والذوبان المتكرر عند -80 درجة مئوية.

ب: رد فعل تحديد PCR

B-1: تحضير نظام تفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل

استخدم cDNA المركب في الخطوة A كقالب ، وقم بإجراء تفاعل PCR باستخدام 2 × PCR EasyTM Mix Plus المتوفر في المجموعة.ضع 2 × PCR EasyTM Mix Plus و cDNA و ddH2O الخالي من RNase على حمام جليدي للسماح له بالذوبان بشكل طبيعي ، ثم حرك جدار الأنبوب للخلط حتى الاستخدام.لإعداد نظام PCR المحدد ، راجع الجدول 3 أدناه.

النموذج 3: تحضير نظام تفاعل PCR 反应 体系 配制

1 *: عادة ما يكون التركيز النهائي للبرايمر هو 0.2-0.25 ميكرومتر للحصول على نتائج أفضل.عندما يكون أداء التفاعل ضعيفًا ، يمكن ضبط تركيز التمهيدي في نطاق 0.1-0.5 ميكرومتر.

B-2: ضبط حالة تفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل

1. بعد تحضير نظام تفاعل البوليميراز المتسلسل بالرجوع إلى الجدول أعلاه ، اخلط بلطف (يمكنك استخدام طرف ماصة لتنفخ بلطف ؛ يمكنك أيضًا مزجها على الدوامة وطردها لتجميع السائل المتناثر على جدار الأنبوب أو غطاء الأنبوب ، وضعه في جاهز للاستخدام على صندوق الثلج).

2. الرجوع إلى إعدادات برنامج تفاعل PCR (الجدول 4) لضبط درجة الحرارة ووقت التفاعل.

ملاحظة: من أجل ضمان نشاط PCR Mix وتحسين كفاءة التضخيم ، فمن الأفضل ضبط شروط PCR على جهاز PCR قبل إعداد نظام PCR.

النموذج 4: ضبط حالة تفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل

1 *: اضبط وقتًا محددًا وفقًا لطول جزء الهدف المضخم.سرعة التضخيم لـ Foregene Taq DNA Polymerase هي 2kb / min.

ملاحظة: تختلف ظروف تفاعل PCR اعتمادًا على الظروف الهيكلية للقالب ، والبادئات ، وما إلى ذلك. بالنسبة لقوالب الحمض النووي الريبي ذات الهياكل الثانوية المعقدة ، يوصى بأن تكون درجة حرارة التفاعل للخطوة الأولى للنسخ العكسي هي 50 درجة مئوية.في عمليات محددة ، من الضروري تصميم ظروف التفاعل المثلى ، بما في ذلك درجة حرارة التلدين ، ووقت التمديد ، وما إلى ذلك ، وفقًا لظروف محددة مثل حجم الجزء المستهدف ، والتسلسل الأساسي للجزء المضخم ، ومحتوى GC و طول التمهيدي.

مخطط عملية RT-PCR