Lnc-RT HeroTM I (مع gDNase) Super Premix لتوليف cDNA من أول حبلا من lncRNA Cat.RTL-09098/09099

Lnc-RT بطل^TMأنا (مع gDNase)

Super Premix لتوليف (كدنا) أول حبلا من lncRNA

Cat.No.RTL-09098/09099

وصف:

Lnc-RT بطل^TMI (مع gDNase) هو نظام نسخ عكسي تم تطويره خصيصًا لـ lncRNA لإزالة تلوث الحمض النووي الجيني بسرعة.يمكن لـ 5 × gDNase Mix إزالة الجينوم المتبقي في RNA بسرعة عند 42 درجة مئوية لمدة دقيقتين ، مما يؤدي بشكل فعال إلى تجنب تدخل الجينوم في نتائج qPCR.

يحتوي 5 × L-RT HeroTM Mix على Foregene LncRNA Reverse Transcriptase تم تطويره خصيصًا بواسطة Foregene ، وهو نوع جديد من النسخ العكسي خصيصًا لـ lncRNA وقوالب RNA المعقدة الأخرى ، مع تقارب RNA أقوى وكفاءة تسجيل عكسية أعلى.يجعل النظام الأمثل معدل النسخ العكسي أسرع ويمكنه بسهولة نسخ قوالب RNA بمحتوى GC عالي وبنية ثانوية معقدة.يمكن إكمال توليف حبلا (كدنا) الأول عند 42 درجة مئوية في 15 دقيقة.

تحديد:

25 × 20 ميكرولتر Rxns ، 50 × 20 ميكرولتر Rxns

مكونات الطقم

معلومات مكون أطقم

-5 × gDNase Mix: عامل إزالة gDNA ، من الضروري استخدام الكاشف وفقًا لتعليمات التشغيل قبل إجراء تفاعل RT (قد لا يتم تجميد محتوى الجلسرين الداخلي ، ولا يجوز تجميده ، وهو ما ينتمي إلى الوضع الطبيعي الظواهر).

- 5 × L-RT HEROTM MIX: يحتوي على Foregene Lncrna Reverse Transcriptase ، RNase Inhibitor ، DNTPS ، Stabilifer ، Enhancer ، Optimizer ، Oligo (DT) 18 Primer).

الميزات والمزايا:

- قدرة فعالة على إزالة جدنا ، والتي يمكن أن تزيل جدنا في القالب في غضون دقيقتين.

-يمكنه عكس نسخ lncRNA بكفاءة.عندما يتعرض منتج النسخ العكسي لـ qPCR ، تكون قيمة Ct أقل من قيمة نظام النسخ العكسي التقليدي.

-نظام نسخ عكسي فعال ، يستغرق 15 دقيقة فقط لإكمال توليف أول حبلا (كدنا).

- القوالب المعقدة: يمكن أيضًا عكس القوالب ذات المحتوى العالي من GC والبنية الثانوية المعقدة بكفاءة عالية.

-نظام النسخ العكسي عالي الحساسية ، يمكن للقوالب على مستوى pg أيضًا الحصول على cDNA عالي الجودة.

- يتمتع نظام النسخ العكسي باستقرار حراري عالي ، ودرجة حرارة التفاعل المثلى هي 42 درجة مئوية ، ولا يزال لديه أداء نسخ عكسي جيد عند 50 درجة مئوية.

متطلبات قالب RNA

من الأفضل استخدام الحمض النووي الريبي المستخرج من العينات الطازجة أو المحفوظة عند -80 درجة مئوية.

- تكامل القالب: سلامة جيدة ، لا تدهور.

- نقاء القالب: IONS والبروتينات و EDTA والإيثانول والفينولات وغيرها من المجلات الموجودة في RNA ستؤثر على نشاط النسخ العكسي وتؤثر في النهاية على تأثيرات النسخ العكسي.

جرعة قالب RNA

- بالنسبة لـ lncRNA: 10ng-1 ميكروغرام إجمالي RNA / نظام 20 ميكرولتر.

- للحمض النووي الريبي العام: 0.1pg-1 ميكروغرام إجمالي RNA أو 0.01pg-0.1 ميكروغرام مرنا / نظام 20 ميكرولتر.

معلومات مكون أطقم

- 5 × gDNase Mix: عامل إزالة gDNA ، من الضروري استخدام الكاشف وفقًا لتعليمات التشغيل قبل إجراء تفاعل RT (قد لا يتم تجميد محتوى الجلسرين الداخلي ، ولا يجوز تجميده ، وهو ما ينتمي إلى الوضع الطبيعي الظواهر).

- 5 × L-RT HERO^TMMIX: يحتوي على Foregene Lncrna Reverse Transcriptase ، RNase Inhibitor ، DNTPS ، Stabilifer ، محسن ، محسن ، Oligo (DT_{) 18}التمهيدي).

الاحتياطات: (يرجى قراءة الاحتياطات بعناية قبل استخدام المجموعة)

- يوصي النموذج باستخدام عينات جديدة أو الحمض النووي الريبي المحفوظ تحت درجة حرارة -80 درجة مئوية (يجب أن يتجنب الحمض النووي الريبي ذوبان الجليد المتكرر ، مما يضمن سلامة الحمض النووي الريبي ، وعدم التدهور).

- من أجل تجنب تلوث RNASE ، يتم إجراء العملية التجريبية في مساحة خالية من RNase ؛يجب ضمان أن يكون رأس البندقية وجهاز الطرد المركزي PCR خاليين من RNASE ؛وارتداء القفازات والأقنعة التي تستخدم لمرة واحدة.

- قبل الاستخدام ، 5 × GDNase Mix و 5 × L-RT HERO^TMيتم وضع MIX على الجليد بحيث يذوب تمامًا ، ويتم خلط الرصاصة الخفيفة ؛تمت صياغة النظام ، يرجى العمل على حمام جليدي لتحسين أداء المجموعة ، وتحسين أداء مجموعة خصوصية تضخيم PCR.

- 5 × L-RT HERO^TMأضافت MIX نسبة محسّنة من النسخ العكسي التمهيدي دون إضافة أي مواد أولية إلى مواد أولية إضافية.

- بالنسبة لقالب الحمض النووي الريبي المعقد للبنية الثانوية ، يمكن زيادة درجة حرارة التفاعل إلى 50 درجة مئوية

سير العمل:

التخزين ومدة الصلاحية:

الأطقم سوبر بريمكس PCRيجب تخزينها عند -20 درجة مئوية.قم بتخزين المنتج في ثلاجة بدرجة حرارة ثابتة عند -20 درجة مئوية مباشرة بعد الاستلام.إذا كانت ظروف التخزين مناسبة ، فلن يؤدي المنتج إلى تدهور أي أداء خلال فترة الصلاحية التي تبلغ 1 عام.

دليل تحليل المشكلة

فيما يلي تحليل للمشكلات التي يمكن مواجهتها في استخدام مجموعات سلسلة Lnc-RT HeroTM I (مع gDNase) ، على أمل أن تكون مفيدة في تجاربك.بالإضافة إلى ذلك ، خصصنا الدعم الفني لمساعدتك في حل المشكلات التجريبية أو التقنية الأخرى بخلاف تعليمات التشغيل والأسئلة.إذا كان لديك أي احتياجات ، يرجى الاتصال بنا: 028-83361257 أو البريد الإلكتروني: Tech@foregene.com.

التضخيم غير المحدد

1. تصميم التمهيدي غير معقول

التوصية: تصميم البادئات وفقًا لمبادئ التصميم التمهيدي.

2. بقايا الجينوم.

اقتراح: تأكد من أن الخطوة الأولى في درجة حرارة تفاعل إزالة gDNA هي 42 درجة مئوية ، ويمكن أيضًا تمديد وقت التفاعل إلى 5 دقائق.

لا توجد إشارة تضخيم بواسطة RT-qPCR

1. تدهورت الحمض النووي الريبي.

توصية: يجب أن تكون المواد المستخدمة في استخراج الحمض النووي الريبي جديدة قدر الإمكان ، ويجب استخدام الحمض النووي الريبي عالي الجودة وعالي النقاء.

2. يحتوي الحمض النووي الريبي على مثبطات.

توصية: تشتمل مثبطات النسخ العكسي بشكل عام على SDS ، وأملاح الغوانيدين ، و EDTA ، وما إلى ذلك. يوصى بغسل راسب الحمض النووي الريبي باستخدام 70٪ من الإيثانول لإزالة المثبطات.

3. قضايا التصميم التمهيدي.

توصية: وفقًا لمبدأ التصميم التمهيدي ، أعد تصميم الاشعال للفحص.

يظهر النطاق الهدف في عنصر التحكم الفارغ

1. تلوث أدوات التشغيل أو الكواشف.

توصية: يجب تعقيم جميع الكواشف أو المعدات اللازمة للتجربة.كن حذرًا ولطيفًا عند المناولة لمنع امتصاص عينات الحمض النووي في الماصة أو انسكابها من أنبوب الطرد المركزي.

2. حدث تلوث أثناء تحضير نظام تفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل.

توصية: اتخذ الاحتياطات اللازمة عند المناولة ، مثل: ارتداء قفازات من اللاتكس ، واستخدام رؤوس المرشح.استخدم Real Time PCR Mix في نظام مقاوم للتلوث.

3. تدهورت الاشعال.

اقتراح: استخدم الرحلان الكهربائي SDS-PAGE لاكتشاف ما إذا كانت البادئات متدهورة ، واستبدلها بأجهزة أولية جديدة لتجارب الكشف عن التألق.