تفسير IF 31.745 المقالات عالية الدرجات ∣ Micro Battlefield: الحرب بين الفيروسات والمضيفين في الخلايا

في 12 أكتوبر 2021 ، نشر فريق Zhou Xi من معهد ووهان لعلم الفيروسات / مختبر الدولة الرئيسي لعلم الفيروسات والأكاديمية الصينية للعلوم وفريق Lulu من وزارة التعليم في علم الفيروسات الجزيئي الطبي / المختبر الرئيسي للجنة الصحة والصحة بجامعة فودان. في مجلة "المناعة" بعنوان الورقة البحثية "تثبيط المثبط الفيروسي لبروتينات RNAi بواسطة المصمم الببتيدات يحمي من العدوى الفيروسية المعوية في الجسم الحي" يكشف لأول مرة أن التصميم العقلاني لمثبطات عديد الببتيد لاستهداف مثبطات RNAi للفيروس المعوي على وجه التحديد يمكن أن يكسر بشكل فعال تأثير VSR من الفيروس.يؤدي تثبيط RNAi إلى إطلاق الوظيفة المناعية المضادة للفيروسات لـ RNAi بشكل كامل ، وهو دليل قوي على أن آلية مناعة RNAi لا تزال موجودة في الثدييات.نظرًا للنشاط الجيد المضاد للفيروسات والسلامة العالية التي تظهرها آلية المناعة هذه في الخلايا والحيوانات ، فإن إمكاناتها للتطور السريري عالية للغاية.

مناعةهالحرب: يشارك كلا الجانبين في الحرب في أي وقت ، وهي ساحة معركة بوسائل متكررة

منذ بداية الحياة ، لم يكن هذا من النوع اللطيف ومرحبًا ، بل ساحة المعركة القاسية في حياتك وموتك.إما أن تخرج من أرضي أو تبقى وتكون جزءًا مني.

من الأشواك الكبيرة الحجم ، والقرون ، والمخالب ، والأسنان ، إلى البلعمة ، والذوبان ، والتسمم على المستوى الخلوي ، إلى قطع الهياكل الجزيئية والتدخل فيها وتدهورها ؛من المختبر إلى الجسم الحي ، من خارج الخلية إلى داخل الخلايا: مرحبًا بكم في ديفين معركة حياة وموت - معركة مناعة تبدأ في أي وقت.

RNAi - آلية مناعية طبيعية وفعالة مضادة للفيروسات

في هذه الحرب غير المقيدة ، هناك آلية مناعية طبيعية (العمل الرئيسي ينظم التعبير الجيني ، والعمل الجانبي ضد غزو الفيروس) ، آلية مناعية فعالة ومستقرة وشاملة (محفوظة للغاية) - RNAi (تدخل RNA) ، والتي تعتبر في أهم وظيفة مضادة للفيروسات في الفطريات والنباتات واللافقاريات.باختصار ، الحمض النووي الريبي مزدوج الشريطة (dsRNA) الناتج عن تكاثر الفيروس يتم التعرف عليه بواسطة بروتين Dicer الخاص بمسار RNAi وينقسم إلى RNA صغير متداخل مشتق من الفيروسات (سيرنا الفيروسي ، vsiRNA) ، ثم يتم تجميعه في مجمع الإسكات الناجم عن الحمض النووي الريبي (RNA) ( مجمع إسكات الناجم عن الحمض النووي الريبي).معقدة ، RISC) ، وبالتالي استهداف تدهور الحمض النووي الريبي الفيروسي.في المقابل ، طورت معظم الفيروسات أيضًا آليات معادية مقابلة ، أي للهروب من مناعة RNAi المضادة للفيروسات عن طريق ترميز مثبطات RNAi الفيروسية (Viral Suppressor of RNAi ، VSR).

اكتشاف آليات المناعة RNAi في الثدييات

ومع ذلك ، نظرًا لأن vsiRNA المتكون من انقسام الحمض النووي الريبي الفيروسي لم يتم العثور عليه في خلايا الثدييات ، فإن آلية المناعة RNAi تعتبر "بقايا تطورية" تم التخلي عنها بعد أن طورت الثدييات آليات أخرى مضادة للفيروسات.ومع ذلك ، منذ عام 2017 ، وجد عدد من الدراسات ذات الصلة مجموعة متنوعة من VSRs المشتقة من الفيروسات ، مما يؤكد أن آلية مناعة RNAi لا تختفي في خلايا الثدييات ، ولكن تمنعها الفيروسات.في الوقت نفسه ، مع اكتشاف بروتينات VSR المشفرة بواسطة مجموعة متنوعة من الفيروسات البشرية المهمة ، تم الكشف عن الآلية الجزيئية لتضاد مسار RNAi.

الببتيدات التي تستهدف VSR: اتجاه جديد لتطوير الأدوية

في هذه الدراسة ، صمم فريق البحث بشكل مبتكر اثنين من الببتيدات التي تستهدف VSR (الببتيدات التي تستهدف VSR ، VTP) ، P1 و P2 ، بناءً على التسلسل الحلزوني A1 و A2 لبروتين الفيروس المعوي EV-A713A VSR.من خلال الكشف عن تراكم الحمض النووي الريبي EV-A71 في خطوط الخلايا المحددة ، تبين أن كلا من P1 و P2 يثبطان بشكل فعال تكاثر الفيروس بطريقة تعتمد على الجرعة.

بعد ذلك ، وفقًا للنتائج التجريبية ، تم تصنيع سلسلة من الببتيدات بشكل إضافي مع الإشارة إلى تسلسل P2 بتأثير أفضل ، ووجد أن الشكل الإسوي المعدل لتحويل النسخ العكسي D (ER-DRI) للببتيد ER كان لديه أفضل تأثير مثبط على تكاثر الحمض النووي الريبي الفيروسي.من أجل التأكد من أن هذه السلسلة من VTPs تستهدف وتعطيل EV-A71 3AVSR وتفتح النشاط المضاد للفيروسات لـ RNAi ، تم استخراج إجمالي الحمض النووي الريبي من الخلايا المصابة وتسلسلها العميق.أظهرت النتائج أن vsiRNAs المكتشفة مشتقة بالفعل من EV-A71.من بينها ، تم إجراء تنقية واستخراج الحمض النووي الريبي لفيروس EV-A71 في الخلايا المصابة باستخدام Qiagen وفورجينمنتشرRNAطقم العزل. (تستخدم هذه المجموعة عمود الدوران والصيغة التي طورتها شركة Foregene ، والتي يمكنها استخراج الحمض النووي الريبي الفيروسي عالي النقاء وعالي الجودة من عينات مثل البلازما والمصل وسوائل الجسم الخالية من الخلايا وزراعة الخلايا

طاف.تضيف المجموعة على وجه التحديد مادة الأكريلاميد الخطية ، والتي يمكنها بسهولة التقاط كميات صغيرة من الحمض النووي الريبي من العينات.يمكن لعمود RNA-Only ربط RNA بكفاءة.يمكن للمجموعة معالجة عدد كبير من العينات في نفس الوقت.

لا تحتوي المجموعة بأكملها على RNase ، لذلك لن يتحلل الحمض النووي الريبي المنقى.يمكن أن يضمن المخزن المؤقت viRW1 و Buffer viRW2 أن الحمض النووي الفيروسي الذي تم الحصول عليه خالي من البروتين أو النيوكلياز أو الشوائب الأخرى ، والتي يمكن استخدامها مباشرة في تجارب البيولوجيا الجزيئية النهائية.)

طقم عزل الحمض النووي الريبي Vrial

في الوقت نفسه ، لم يتمكن VTP من ممارسة تأثير مضاد للفيروسات على فيروس EV-A71 مع حدوث طفرة وحذف وظيفة 3A-VSR ، وكذلك في Dicer1 أو الخلايا التي تعاني من نقص AGO2 المصابة بفيروس EV-A71.ثبت أن آلية عملها تستهدف بالفعل 3A-VSR وتعتمد على مسار RNAi.

لاستكشاف الإمكانات قبل السريرية لـ ER-DRI ، قام فريق البحث بتقييم تأثيره المضاد للفيروسات في الفئران المصابة بالفيروس EV-A71 عن طريق الحقن داخل الصفاق من الببتيدات ذات العلامات الفلورية.أظهرت النتائج أن ER-DRI يحفز أيضًا الاستجابة المناعية المضادة للفيروسات RNAi في الفئران ، ويثبط تكاثر EV-A71 ، ويحسن الأعراض السريرية للفئران المصابة ، ويقلل من موت الفئران بسبب العدوى.في الوقت نفسه ، أظهر اختبار السمية الحادة أن ER-DRI ليس له ضرر واضح على صحة الفئران.

آلية المناعة RNAi التي يتم فتحها بواسطة VTPs قوية بما يكفي للتوسط في نشاط فعال مضاد للفيروسات ، مما يدل بوضوح على الأهمية الفسيولوجية والجدوى العلاجية لـ RNAi كمناعة مضادة للفيروسات في الثدييات.بالإضافة إلى ذلك ، أثبتت هذه الدراسة أن VSRs هي أهداف قابلة للدواء ، وتوفر إستراتيجية جديدة لاستهداف VSRs للعلاج المضاد للفيروسات ، والببتيدات مثل ER-DRI تحمل وعدًا كبيرًا باعتبارها VTDs الأولى في فئتها لعدوى الفيروس المعوي.

رابط المقال:يحمي تثبيط المثبط الفيروسي لبروتينات الحمض النووي الريبي بواسطة الببتيدات المصممة من العدوى الفيروسية المعوية في الجسم الحي - PubMed (nih.gov)

رابط المنتج:طقم عزل الحمض النووي الريبي الفيروسي