كيفية اختيار البدء الساخن Taq / DNA polymerase

يستخدم إنزيم طق البدء الساخن على نطاق واسع.بالمقارنة مع بوليميراز الحمض النووي العادي ، يمكن أن يتجنب إنزيم Taq البدء الساخن بشكل فعال بعض التضخيم غير المحدد وتشكيل ثنائيات التمهيدي ، ويمكن أن يحسن بشكل فعال معدل نجاح تضخيم الجين المستهدف.خاصة في مجال الاختبارات الجينية ، تم تحديد إنزيم طق الساخن كمعيار إلزامي في الصناعة ، ولا ينبغي استخدام بوليميريز الحمض النووي العادي.كما يتضح مما سبق ، تستخدم إنزيمات طق الساخنة على نطاق واسع.في الوقت الحاضر ، هناك العديد من العلامات التجارية لأنزيمات طق الساخنة في السوق المحلية ، ولكن لا توجد العديد من إنزيمات طق ذات البداية الساخنة ذات الجودة العالية.في مواجهة العديد من منتجات إنزيم طق ذات البدء الساخن ، كيف يجب أن نختار؟

1. حدد البدء الساخن لإنزيم طق بكفاءة تضخيم عالية

ترتبط كفاءة تضخيم PCR ارتباطًا وثيقًا بأداء إنزيم Taq.بعد تحسين نظام تفاعل إنزيم Taq الجيد ، تكون كفاءة التضخيم أعلى من 95٪ ، ويكون نطاق التضخيم لمقدار القالب الأولي واسعًا.يمكن الحصول على التضخيم المرضي عندما يكون محتوى الجين المستهدف منخفضًا ، وليس من السهل التسمم عندما تكون كمية القالب عالية ، وفترة التضخيم الأسي طويلة.بالنسبة لإنزيم Taq ذي الأداء الضعيف ، حتى لو تم تحسين نظام التفاعل لعدة مرات ، فإن كفاءة التضخيم لا تزال أقل من 90٪ ، والشكل "S" لمنحنى التضخيم غير واضح ، والمنحدر صغير ، و منحنى مسطح.عندما تكون كمية القالب منخفضة ، لا يمكن تضخيمها ، وعندما تكون كمية القالب عالية ، فإن تأثير التضخيم ليس مثاليًا.لذلك ، فإن اختيار بوليمرات الحمض النووي بكفاءة تضخيم عالية أمر بالغ الأهمية لنجاح PCR و qPCR.

2. حدد البدء الساخن لإنزيم طق مع قوة إنزيم قوية

ترتبط القوة الأنزيمية لإنزيم طق بكفاءة التضخيم.بشكل عام ، كلما زادت القوة الأنزيمية لإنزيم Taq ذي البداية الساخنة ، زادت فترة النمو الأسي لتضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) ، وكلما زاد المنحنى النموذجي على شكل S ، زادت قيمة إشارة التألق ، والأكثر ملاءمة لاكتشاف تعدد الإرسال PCR .يمكن أن تدعم بوليميرات الحمض النووي ذات القدرة الأنزيمية الضعيفة بشكل عام تفاعلات 2-plex فقط.عند إجراء تفاعلات 3-plex ، يكون منحنى التضخيم منخفضًا ، وقيمة إشارة التألق منخفضة ، ولا يوجد منحنى تضخيم نموذجي ، وبالتالي يصعب الحكم على النتائج.

3. اختر إنزيم طق سريع البدء مع حساسية عالية

بشكل عام ، تتمتع بوليميراز الحمض النووي بكفاءة تضخيم عالية وحساسية عالية ، ولكن هناك أيضًا تناقضات.إذا كانت وفرة الجين المستهدف للعينة المراد تضخيمها منخفضة ، يوصى باختبار حساسية التضخيم لإنزيم Taq.تتمثل طريقة الكشف الأكثر شيوعًا في إجراء تخفيف متدرج بمقدار 10 أو 5 أضعاف لجزء البلازميد الجيني المستهدف ، وإجراء الكشف عن تفاعل البوليميراز المتسلسل عند التخفيف السفلي ، واختيار إنزيم Taq ذي البداية الساخنة مع حساسية كشف أعلى.

يتضح مما سبق أن الباحثين بحاجة إلى الاختيار وفقًا لمتطلباتهم التجريبية وظروف التمويل الخاصة بهم.من الأفضل القيام بتجربة تضخيم التخفيف المتدرج لاكتشاف كفاءة التضخيم وحساسية إنزيم طق البدء الساخن.

مثال على Foregene"بوليميراز DNA Taq:

Foreasy HS Taq DNA Polymerase

وصف

Foreasy HS Taq DNA Polymerase عبارة عن بوليميريز DNA يتم التعبير عنه في بكتيريا هندسة الإشريكية القولونية بواسطة تقنية إعادة التركيب الجيني.يتم دمج الإنزيم مع مخزن مؤقت للتفاعل الفريد ، مما يجعل المنتج شديد المقاومة ومتوافقًا ، ويمكنه استخدام محلول العينة (نظام تحلل Foregene) مباشرةً كقالب لتفاعلات الكشف.

طلب

PCR النوعي والكشف الكمي PCR للقوالب النقية والقوالب غير المنقاة.

مراقبة الجودة

1. لم يتم الكشف عن نشاط نوكلياز خارجي

2. طريقة PCR للكشف عن الحمض النووي الجيني المتبقي بدون مضيف

3- يمكنه تضخيم الجينات أحادية النسخة بشكل فعال في الجينوم البشري

4.خزن في درجة حرارة الغرفة لمدة أسبوع ، لن يتغير النشاط بشكل واضح